血清至少1.0mL(全血2.0mL)。抽血後置於37℃中凝固後(若無溫箱則使用溫水)，室溫下離心 3500rpm，5分鐘，分離血清。分離後之血清應保存於2-8℃不可冷凍，以保存其效價。勿使用冷藏未離心的全血檢體。

檢體退件：血漿檢體；有脂血、溶血或檢體不足之檢體無法分析

感染M.pneumoniae的患者血清通常會出現冷凝集素，但是冷凝集素也會在其他的疾病出現：例如：Raynaud’s徵候群、肝硬化、流行性感冒、溶血性貧血或是其他急性呼吸道感染。

此項檢查可輔助診斷由肺炎黴漿菌感染所引發之原發性非典型肺炎及某些溶血性貧血，其效價與疾病之嚴重程度有關。此效價在感染7天後開始出現冷凝抗體，發病後3-4週會達到高峰，然後很快的消失。

效價≧1：32視為陽性，甚至可高達1：2048，但只有約33-76%的病人可測得陽性結果。

若單一檢體測試效價達≧1：32以上，則可推測近期曾受M. pneumoniae感染，但是以這種判讀方式的偽陽性較高。最好是在發病時和恢復期，分別採取檢體測定，若前後兩支檢體的效價上升四倍或更高，則可表示近期受M. pneumoniae感染。