於尿液收集桶預先加入10 mL 6N HCl，再收集24小時尿液。標示尿總量，混和均勻後送檢15 mL酸化尿液，檢體量至少10 mL。尿液最佳pH值為3-6。保存方式：2-8℃可保存15天，-25至-15℃可保存1個月。

收集24小時尿液：

1. 排空早上第一次的尿液，記錄時間。
2. 收集24小時內尿液，包括滿24小時最後一次的尿液。
3. 尿液收集在3000 mL的塑膠桶內，內容物預先放置10 mL 6N HCl。
4. 收集時間內，桶子放在冰上或冰箱內。插管使用尿袋者，將尿袋之尿液放置冰上，每小時收入塑膠桶內。
5. 記錄24小時尿液總量，將整桶搖一搖混合均勻，送檢15 mL，送檢單上請註明24小時尿液總量，送檢前檢體冷藏。
6. 在醫師的同意下，收集尿液的前兩天停止處方藥物，例如：phenothiazine、抗高血壓藥物、levodopa(停兩週)，直到最後一次滿24小時收集尿液後回復。
7. 如果病人在24小時收集時間內，不小心排掉尿液沒有收集到，請將整桶倒掉，再加酸化保存液，第二天早上重新再來一次。

在收集尿液時不建議作激烈運動。
採檢前72小時禁食Aspirin、香蕉、酪梨、柑橘類、啤酒、葡萄酒、咖啡、茶、巧克力、可可、香草、胡桃等。

檢體退件：檢體量不足10 mL；尿液pH值 ≧8。

使用於評估腎上腺皮質功能，上昇於疾病急性期及庫辛氏症候群，多毛症，肥胖，嚴重高血壓。下降於功能不全或酵素缺損如Addison’s disease、hypopituitarism、congenital adrenal hyperplasia。

可以使用血清cortisol或尿液free cortisol取代檢驗，敏感度及特異性更好。